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主營(yíng)產(chǎn)品:主要技術(shù)服務(wù):細(xì)胞STR鑒定;支原體檢測(cè);細(xì)胞種屬檢測(cè);端粒長(zhǎng)度檢測(cè);端粒酶活性檢測(cè)等。
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    支原體qPCR陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線翹尾的原因

    發(fā)布時(shí)間: 2025-05-22  點(diǎn)擊次數(shù): 39次


    標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線:呈S型,分為基線期、指數(shù)起始期、指數(shù)擴(kuò)增期和平臺(tái)期,且要求拐點(diǎn)清楚,整體平行性好,基線平而無(wú)上揚(yáng)現(xiàn)象。

    陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線翹尾:是指ct值在35之后(判讀臨界點(diǎn))出現(xiàn)擴(kuò)增。

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    小編根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下原因:

    1、環(huán)境污染:如實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常稀釋陽(yáng)性樣本或出現(xiàn)高濃度陽(yáng)性樣本,會(huì)污染環(huán)境造成氣溶膠污染。

    解決方案:(1建議 qPCR 反應(yīng)板上陽(yáng)性對(duì)照的排布應(yīng)遠(yuǎn)離待測(cè)樣本和陰性對(duì)照。

    2使用不同的移液器添加陽(yáng)性對(duì)照與待測(cè)樣本、陰性對(duì)照,并使用帶濾芯的槍頭進(jìn)行加樣,加樣順序是:陰性對(duì)照,待測(cè)樣本,陽(yáng)性對(duì)照。

    3)陽(yáng)性樣本分區(qū)操作,設(shè)置專(zhuān)門(mén)的陽(yáng)性操作區(qū)。

    2、無(wú)菌操作不到位:環(huán)境中存在大量支原體,如人口腔中存在口腔支原體、土壤中存在發(fā)酵支原體。如果無(wú)菌操作不規(guī)范,都會(huì)引入污染。

    解決方案:(1進(jìn)入無(wú)菌室操作前,佩戴一次性袖套,穿專(zhuān)用工作服、一次性帽子及鞋套、口罩。工作服、帽及鞋套、口罩,應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間,工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。

    2)從槍頭盒中取出槍頭時(shí),尖部不能觸及外露部位及離心管和管架邊。

    3)操作中,不能在樣品上方翻轉(zhuǎn)瓶蓋,袖口不能掠過(guò)樣品上方。

    4換下的專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)服,進(jìn)行紫外線,一次性鞋套額帽子扔進(jìn)垃圾桶。

    5)無(wú)菌室和緩沖間定期大掃除,保持整潔。

    6)每周用核酸清除劑清潔無(wú)菌操作臺(tái)、傳遞窗和桌面,實(shí)驗(yàn)垃圾建議當(dāng)場(chǎng)封閉并丟棄

    7實(shí)驗(yàn)前用1% 84消毒液擦凈臺(tái)面及四周,放好需用的實(shí)驗(yàn)器材及各種溶液,并用酒精棉球擦拭,更換干凈的管架。

    3、試劑耗材污染:陽(yáng)性移液槍未專(zhuān)用,直接加樣,易引起污染;槍頭、離心管、PCR管等耗材,不是無(wú)菌或暴露在陽(yáng)性環(huán)境中,也易引入污染。

    解決方案:(1)使用專(zhuān)用陽(yáng)性移液槍加陽(yáng)性樣本,同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性區(qū)。

    (2)使用無(wú)菌耗材,耗材用完后封口,避免暴露在環(huán)境中。

    3)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立分區(qū),可分為配液間(潔凈區(qū))、樣本處理區(qū)、陽(yáng)性區(qū)和核酸擴(kuò)增區(qū);不同分區(qū)的耗材和移液器勿交叉使用。

    4、試劑盒在配制過(guò)程中污染:如果操作不當(dāng),環(huán)境和耗材也會(huì)引入污染。

    解決方案:可以通過(guò)試劑盒入庫(kù)前質(zhì)控檢測(cè)。

    5、非特異性擴(kuò)增:試劑盒凍融次數(shù)過(guò)多,導(dǎo)致引物探針斷裂。

    解決方案:試劑避免反復(fù)多次凍融,可分裝儲(chǔ)存。

     


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