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主營產(chǎn)品:主要技術(shù)服務(wù):細(xì)胞STR鑒定;支原體檢測;細(xì)胞種屬檢測;端粒長度檢測;端粒酶活性檢測等。
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    DNA測序的建庫流程

    發(fā)布時(shí)間: 2024-12-06  點(diǎn)擊次數(shù): 334次

    什么是文庫制備?在待測片段兩端連接特定接頭從而使其符合測序平臺(tái)要求的過程。Illumina 芯片F(xiàn)lowcell(流動(dòng)池)是有著8個(gè)lane(泳道)的玻璃板,每個(gè)lane可以測一個(gè)樣本或者多樣本的混合物,且隨機(jī)布滿了能夠與文庫兩端接頭分別互補(bǔ)配對或一致的寡核苷酸(oligos,P7和P5接頭),一個(gè)lane包含兩列,每一列有60個(gè)tile(每條lane有120個(gè)格子),每個(gè)tile有很多個(gè)凹坑,會(huì)種下不同的cluster(蔟),每個(gè)tile在一次循環(huán)中會(huì)拍照4次(每種堿基一次),一次反應(yīng)cycle在每條lane拍120張照片。Illumina 文庫:基于TA連接P5/P7:和芯片上的oligos(P5‘/P7’)可以互補(bǔ),目的是讓文庫接到芯片上。Index:標(biāo)簽,也叫Barcode,因?yàn)橐粋€(gè)lane可以同時(shí)測多個(gè)樣品,給每個(gè)樣本帶個(gè)帽子,測序后可以區(qū)分誰是誰的。接頭連接:利用TA克隆在DNA片段兩端加上能夠與測序儀配合的接頭序列。DNA建庫流程:DNA片段化、接頭連接、連接產(chǎn)物純化、PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物純化、文庫長度分選片段化由于目前市場中NGS測序儀的測序長度通常在 150-550bp 之間,因此需要使用機(jī)械打斷或酶切打斷的方法將大片段基因組DNA片段化為小片段的DNA。片段化酶是隨機(jī)內(nèi)切酶,不受特定酶切位點(diǎn)的限制,隨機(jī)切割對應(yīng)模板DNA,片段化的產(chǎn)物屬于粘性末端,后續(xù)需要進(jìn)行末端修復(fù)。酶切形成兩條單鏈末端時(shí),產(chǎn)生末端的核苷酸順序不是平齊的,稱為粘性末端;產(chǎn)生核苷酸順序平齊的末端,則稱為平末端。

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