CHO細胞DNA殘留的檢測

CHO細胞DNA殘留的來源和影響

生物制品是指應用生物技術生產的制劑，包括疫苗、血液制品、生物技術藥物等，這些制品在疾病治療、腫瘤與免疫、血液病等領域具有不可替代的治療作用。哺乳動物細胞表達系統在重組單抗藥物的研發和生產中有廣泛的應用,中國倉鼠卵巢(Chineseovary,CHO)被廣泛的應用于生物制品領域。CHO細胞有良好的蛋白表達能力，表達的重組蛋白具有與人源蛋白相似的翻譯后修飾，如糖基化修飾，因此能夠提高治療效果。并且CHO胞外蛋白分泌能力和穩定性都表現優異，可提高生物制品的產量和質量。CHO被廣泛應用于抗體類藥物的生產，包括完整抗體、抗體片段等;也被廣泛用于生產多種重組蛋白疫苗，如乙型肝炎疫苗等。

需要在生產過程中去除來自宿主細胞的雜質，盡可能排除宿主細胞殘留物質如DNA對產品質量的影響。現實情況是即使經嚴格的純化和質控，終產品仍可能殘留宿主細胞DNA(residual host cell DNA,rC DNA)，存在致瘤性、免疫原性、感染性等安全隱患。世界衛生組織(WHO)、FDA、歐盟和各國的藥物注冊監管機構,要求生物制品終產品中宿主細胞DNA的殘留量不超過一定的標準。生產工藝和方法不同，要求也有一定差異，生物制劑宿主細胞DNA殘留量一般應<100 pg/劑，最高應<10ng/劑。在《中國藥典》三部(2020版)中規定，以動物細胞生產的生物制劑DNA殘留量應≤100pg/劑，而以細菌、真菌生產的生物制劑的DNA殘留量應≤10ng/劑。

CHO細胞DNA殘留檢測

生物制品生產周期長、生產工藝復雜，其中宿主細胞殘留DNA是一項重要的安全性指標。檢測宿主細胞殘留DNA的方法包括DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR(qPCR)法。定量PCR的適用性較其他檢測方法更好。從qPCR原理來看Taqman探針法優于熒光染料的SYBR Green法。《中國藥典(2020版)》也在通則3407外源性DNA殘留量測定法中新增定量PCR法。定量qPCR法更靈敏、準確、省時，已得到廣泛應用。

在此基礎上翼和研發了針對CHO宿主細胞DNA殘留的檢測試劑盒（CHO 100），是一款操作簡便、靈敏度高、結果直觀、專屬性強的宿主DNA殘留量檢測試劑盒，為CHO細胞DNA殘留量的檢測提供可靠方法。Biowing® CHO殘留DNA檢測試劑盒用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中CHO宿主細胞DNA。采用一套引物探針在FAM通道定量檢測樣品中CHO殘留DNA，另外一套引物探針在HEX通道檢測內參DNA。該試劑盒提供了陰性對照，NCS對照和標準品濃度梯度稀釋的標準曲線，可以實現CHO宿主細胞DNA殘留量的檢測,整個檢測流程大概3小時。