CHO細(xì)胞DNA殘留的檢測

CHO細(xì)胞DNA殘留的來源和影響

生物制品是指應(yīng)用生物技術(shù)生產(chǎn)的制劑，包括疫苗、血液制品、生物技術(shù)藥物等，這些制品在疾病治療、腫瘤與免疫、血液病等領(lǐng)域具有不可替代的治療作用。哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在重組單抗藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中有廣泛的應(yīng)用,中國倉鼠卵巢(Chineseovary,CHO)被廣泛的應(yīng)用于生物制品領(lǐng)域。CHO細(xì)胞有良好的蛋白表達(dá)能力，表達(dá)的重組蛋白具有與人源蛋白相似的翻譯后修飾，如糖基化修飾，因此能夠提高治療效果。并且CHO胞外蛋白分泌能力和穩(wěn)定性都表現(xiàn)優(yōu)異，可提高生物制品的產(chǎn)量和質(zhì)量。CHO被廣泛應(yīng)用于抗體類藥物的生產(chǎn)，包括完整抗體、抗體片段等;也被廣泛用于生產(chǎn)多種重組蛋白疫苗，如乙型肝炎疫苗等。

需要在生產(chǎn)過程中去除來自宿主細(xì)胞的雜質(zhì)，盡可能排除宿主細(xì)胞殘留物質(zhì)如DNA對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。現(xiàn)實情況是即使經(jīng)嚴(yán)格的純化和質(zhì)控，終產(chǎn)品仍可能殘留宿主細(xì)胞DNA(residual host cell DNA,rC DNA)，存在致瘤性、免疫原性、感染性等安全隱患。世界衛(wèi)生組織(WHO)、FDA、歐盟和各國的藥物注冊監(jiān)管機(jī)構(gòu),要求生物制品終產(chǎn)品中宿主細(xì)胞DNA的殘留量不超過一定的標(biāo)準(zhǔn)。生產(chǎn)工藝和方法不同，要求也有一定差異，生物制劑宿主細(xì)胞DNA殘留量一般應(yīng)<100 pg/劑，最高應(yīng)<10ng/劑。在《中國藥典》三部(2020版)中規(guī)定，以動物細(xì)胞生產(chǎn)的生物制劑DNA殘留量應(yīng)≤100pg/劑，而以細(xì)菌、真菌生產(chǎn)的生物制劑的DNA殘留量應(yīng)≤10ng/劑。

CHO細(xì)胞DNA殘留檢測

生物制品生產(chǎn)周期長、生產(chǎn)工藝復(fù)雜，其中宿主細(xì)胞殘留DNA是一項重要的安全性指標(biāo)。檢測宿主細(xì)胞殘留DNA的方法包括DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR(qPCR)法。定量PCR的適用性較其他檢測方法更好。從qPCR原理來看Taqman探針法優(yōu)于熒光染料的SYBR Green法。《中國藥典(2020版)》也在通則3407外源性DNA殘留量測定法中新增定量PCR法。定量qPCR法更靈敏、準(zhǔn)確、省時，已得到廣泛應(yīng)用。

在此基礎(chǔ)上翼和研發(fā)了針對CHO宿主細(xì)胞DNA殘留的檢測試劑盒（CHO 100），是一款操作簡便、靈敏度高、結(jié)果直觀、專屬性強(qiáng)的宿主DNA殘留量檢測試劑盒，為CHO細(xì)胞DNA殘留量的檢測提供可靠方法。Biowing® CHO殘留DNA檢測試劑盒用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中CHO宿主細(xì)胞DNA。采用一套引物探針在FAM通道定量檢測樣品中CHO殘留DNA，另外一套引物探針在HEX通道檢測內(nèi)參DNA。該試劑盒提供了陰性對照，NCS對照和標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以實現(xiàn)CHO宿主細(xì)胞DNA殘留量的檢測,整個檢測流程大概3小時。